图5破骨细胞鉴定及计数 and counting of osteoclasts

下室培养液中OPG、RANKL的含量

模型组+破骨细胞(OVX+OC)中抑制骨吸收的OPG含量最低，促进破骨细胞分化及成熟的RANKL含量最高。经骨碎补灌胃后(OVXDF+OC)，OPG含量明显升高，RANKL含量明显降低。三组比较，OPG含量：SHAM+OC组>OVXDF+OC组>OVX+OC组，差异具有统计学意义(P<0.05)；RANKL含量：SHAM+OC组

图6各组大鼠OPG、RANKL含量Fig.6The content of OPG, RANKL in rats of each group

2.5BMSCs中Wnt10b、β-catenin OPG、RANKL mRNA测量

模型组+破骨细胞(OVX+OC)中Wnt10b、β-catenin、OPG mRNA相对量最低，RANKL mRNA相对量及RANKL/OPG最高，灌胃后(OVXDF+OC)Wnt10b、β-catenin、OPG mRNA升高，RANKL mRNA、RANKL/OPG降低。三组比较，Wnt10b、β-catenin、OPG mRNA：SHAM+OC组>OVXDF+OC组>OVX+OC组，差异具有统计学意义(P<0.05)。RANKL mRNA、RANKL/OPG：SHAM+OC组

图7各组大鼠Wnt10b、β-catenin、OPG、RANKL mRNA表达 expression of Wnt10b, beta-catenin, OPG, and RANKL in rats of each group

2.6BMSCs中Wnt10b、β-catenin、OPG、RANKL蛋白表达情况

模型组+破骨细胞(OVX+OC)中Wnt10b、β-catenin、OPG蛋白表达最低，RANKL蛋白表达及RANKL/OPG最高，灌胃后(OVXDF+OC)Wnt10b、β-catenin、OPG蛋白表达升高，RANKL蛋白表达及RANKL/OPG降低。三组比较，Wnt10b、β-catenin、OPG蛋白表达：SHAM+OC组>OVXDF+OC组>OVX+OC组，差异具有统计学意义(P<0.05)。RANKL蛋白表达及RANKL/OPG：SHAM+OC组

3 讨论

3.1BMSCS与骨质疏松症

图8各组大鼠Wnt10b、β-catenin、OPG、RANKL 蛋白表达 expression of Wnt10b, beta-catenin, OPG, and RANKL in rats of each group

随着老龄社会的到来，骨质疏松症已成为世界性健康问题，其原因在于骨形成与骨吸收之间的失耦联。既往对骨质疏松症的研究多集中在成骨细胞、破骨细胞及其相互关系[6]，随着研究的深入，与成骨细胞及破骨细胞共存于骨骼微环境中的BMSCs对骨代谢的作用逐渐得到重视[7-9]。BMSCs是一种具有多种分化潜能的成纤维样细胞，在不同微环境下具有向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞分化的能力，有骨修复潜能[10]，在此过程中，Wnt/β-catenin信号通路起重要作用。研究表明，激活Wnt/β-catenin信号通路可提高成骨关键因子RUNX2的表达[11-12]，促进间充质干细胞的成骨分化[13]，抑制其成脂及成软骨分化。同时，BMSCs还可通过多种途径调控破骨细胞的分化、成熟及活性[14-16]，其中，OPG/RANKL/RANK信号通路是重要途径之一。OPG和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL)主要由成骨细胞、骨髓间充质干细胞分泌。RANKL可以与破骨细胞膜上的核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-KB，RANK)相结合，激活RANKL/RANK信号通路，调控破骨细胞的分化、成熟及活性。OPG亦可以与RANK相结合，与RANKL相竞争性，阻断RANKL/RANK信号通路的传导，起到抑制破骨细胞的作用。研究表明，在无或低浓度破骨细胞诱导因子的情况下，BMSCs与破骨细胞前体细胞共同培养可促进破骨细胞的形成[17]；而在高浓度破骨细胞诱导因子作用下，BMSCs对破骨细胞的分化、成熟起抑制作用[18]。表明BMSCs对破骨细胞具有双重作用，而骨骼微环境会影响其对破骨细胞的调控。

3.2骨碎补防治骨质疏松

骨碎补为水龙科植物槲蕨 Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm的干燥根茎，在祖国医学中，首见于《药性论》，其性味苦、温，归肝、肾经，具有活血续伤、补肾强骨的功效，主治跌打损伤或创伤，筋骨损伤，瘀滞肿痛；以及肾虚腰痛脚弱，耳鸣耳聋，牙痛，久泻等。常用剂量为9～20 g，是目前治疗骨质疏松症常用中药之一[19]。现代药理学研究发现其主要生物活性成分是黄酮类化合物，而柚皮苷又是其黄酮类化合物的主要成分[20]。研究表明，骨碎补及其提取物可通过改善微循环[21]，调节雌激素[22]、调节细胞的增值分化[23-24]及调节信号通路等多种机制，防治骨质疏松。其中，Wnt/β-catenin和OPG/RANKL/RANK信号通路无疑是其调控的重要途径。骨碎补及其提取物可以激活Wnt/β-catenin信号通路，促进骨髓间充质干细胞的成骨分化，抑制其成脂分化[25-26]，通过OPG/RANKL/RANK调节破骨细胞引起的骨吸收[27-28]。

3.3骨碎补通过调节BMSCs分泌OPG、RANKL调控破骨细胞的分化成熟

文章来源：《云南中医中药杂志》 网址: http://www.ynzyzyzz.cn/qikandaodu/2020/1004/469.html